Förlusten kom efter en jämn match mot taiwanesiska Chan Hao-Ching och australiska Maya Joint som slutade med en 1–2-förlust för amerikanskorna. I både andra och tredje set krävdes tiebreak.
Det är första gången som Serena, 44, och Venus Williams, 46, spelar tillsammans i turneringen sedan 2022. Beskedet om att systrarna fått wildcard till US Open kom i slutet på augusti.
Williams-systrarna har tidigare vunnit dubbelturneringen 1999 och 2009.